[摘要]
目的:探讨HIV-1反式激活因子(transactivator, Tat)对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium, RPE)屏障功能的影响及其可能的分子机制。
方法:培养人RPE D407细胞系,分为Tat蛋白处理组、Tat蛋白热灭活组、正常对照组。细胞培养于Millipore-CM微孔滤膜插入式培养皿上,通过经上皮电阻(TER),荧光素钠渗透性评价Tat作用前后紧密连接屏障功能的变化。将细胞培养于24孔板中,收集细胞后,通过 Real-Time PCR 和Western Blot 分别从mRNA和蛋白水平研究Tat对紧密连接蛋白occludin、claudin-1表达的影响。
结果:D407细胞培养8天后,TER达到稳定状态。Tat蛋白处理24小时后,Tat蛋白处理组较对照组(Tat蛋白热灭活组、正常对照组)的TER明显减低,而荧光素钠渗透性明显增高(P<0.01)。occludin 的mRNA 和蛋白表达水平在组间无差异(P>0.05), 而claudin-1 的mRNA 和蛋白表达在Tat蛋白处理组较对照组显著的减低(P<0.05)。
结论:HIV-1 Tat蛋白可能通过对RPE紧密连接蛋白claudin-1表达的特异性调节,导致血-视网膜屏障的完整性受损,促使HIV进入眼内,进而参与了HIV相关眼病的发生。
|