目的:观察大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)形成过程中COX-2的表达情况及与CNV的关系,探讨COX-2抑制剂Celecoxib对CNV的抑制作用。
方法:1)Sprayue Dawley (SD)大鼠角膜碱烧伤后,建立角膜新生血管模型,随机分为实验组I组、实验II组、实验III组)和对照组,分别结膜下注射不同浓度的Celecoxib和生理盐水。碱烧伤后24h、2d、4d、7d、14d采用带有眼前段照相机的裂隙灯显微镜照相并测量角膜新生血管长度,计算角膜新生血管面积。2)SD大鼠角膜碱烧伤后各个时期,免疫组织化学染色方法检测COX-2和VEGF蛋白在角膜各层中的分布,测定积分光密度值确定蛋白的表达量。3)RT-PCR检测COX-2和VEGF mRNA在各组角膜组织的表达并对其进行半定量。4)比较实验组和对照组各个时期COX-2和VEGF蛋白和mRNA表达量的差别,并对其进行统计学分析,了解COX-2与VEGF的相关性。
结果:1)碱烧伤2d后,角膜新生血管芽开始形成,4d后出现成熟的新生血管腔。活化的COX-2、VEGF蛋白和mRNA的表达在角膜新生血管的形成中均有一动态变化,即碱烧伤24h开始增加、4d时达到高峰、7d后开始回落,14d时仍可见到阳性表达。2)COX-2表达部位主要在大鼠角膜损伤上皮以及随后修复的上皮层、基质层中浸润的炎症细胞和新生血管内皮细胞,VEGF的表达区域和COX-2表达的部位高度一致。3)实验组Ⅱ和实验Ⅲ组的角膜混浊度显著低于对照组,CNV的长度和面积显著低于对照组(p<0.05),实验组Ⅰ与对照组角膜混浊度和CNV面积的差异无显著性。实验II组和实验Ⅲ组COX-2和VEGF 蛋白和mRNA表达量与对照组的差别有显著性(p<0.05),实验I组与对照组的差别无显著性。实验组和对照组COX-2与VEGF的表达呈正相关。
结论:1)COX-2在炎症性角膜新生血管形成过程中表达上调,其调控VEGF的表达,在角膜新生血管的形成过程中起着重要作用。2)Celecoxib能抑制COX-2的表达,有效的抑制角膜新生血管的形成。
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