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| Rac1、HIF-1a在缺氧的人视网膜色素上皮细胞及小鼠脉络膜新生血管模型中的表达 |
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作者：郝晓凤 … 文章来源：陕西省西安市 第四军医大学西京医院眼科 710032 点击数：1729 更新时间：2007/6/21 10:19:18 
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| 目的：观察Rac1和HIF-1a在缺氧的人RPE细胞及激光诱导的小鼠CNV模型中的表达，探讨二者在CNV发生过程中的作用。
方法：（1）在含有200µM CoCl2的培养液内分别培养人RPE细胞0、0.5、1、2、4、8、12和24 h，建立人RPE细胞胞内化学缺氧模型。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测缺氧不同时间Rac1和HIF-1a的表达。（2）用532nm激光诱导小鼠CNV模型，分别在光凝后1、3、7、14、28 d 行荧光素眼底血管造影后处死小鼠，摘除眼球行病理切片观察及免疫组织化学检测Rac1和HIF-1α蛋白在 CNV 组织中的表达。
结果：（1）RT-PCR结果显示：常氧状态下，RPE细胞内Rac1 mRNA 表达呈阴性，缺氧早期RPE细胞内即有Rac1 mRNA的表达，且呈时间依赖性，缺氧4h达到高峰，与常氧组对照具有显著差异(P<0.05)；Western blot检测结果显示：常氧状态下RPE内未发现Rac1的表达，缺氧1 h可见弱表达，2 h明显上升，8 h达到高峰，随后开始下降。用Sigma Gel 1.0和Sigma Plot 4.0软件对Western blotting结果进行分析后显示：缺氧2、4、8和12 h组Rac1灰度分别是1 h组的2.1、3.2、3.8和2.8倍，经SNK-q检验后发现，2 h和12 h之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，其余各组之间两两比较的差异均有统计学意义 (P＜0.05)；免疫细胞化学方法显示：缺氧条件下RPE细胞早期即有Rac1和HIF-1α的表达，Rac1主要位于胞浆，随着缺氧时间的延长，阳性表达量上调，在8 h达到高峰，12 h开始下降。与常氧组对照，具有显著性差异（P<0.05），同Western blot检测结果相符。HIF-1α位于胞浆和胞核，缺氧12 h 达到高峰，24 h 下降。与常氧组对照，具有显著差异（P<0.05）。且二者表达呈显著正相关（r=0.985,P<0.05）。（2）激光诱导的小鼠 CNV 组织形成过程中均有 Rac1和 HIF-1α 蛋白的表达，激光光凝早期二者表达均增高，激光照射后3和7 d 均达到高峰，Rac1 蛋白的阳性表达率分别为 34.58%和53.35%，而 HIF-1α 蛋白的阳性率为33.05% and 50.35%。光凝 14 d 时二者的表达均下降，阳性率分别为25.50% and 31.97%，二者表达呈显著正相关(r＝0.943 ，P =0.016)。
结论：（1）Rac1 和 HIF-1α 在早期缺氧的RPE细胞中呈瞬时高表达，可能与 CNV 的形成有关，且二者之间存在显著正相关性，Rac1 的表达峰值早于 HIF-1α 的表达峰值，表明Rac1 对缺氧的 RPE 细胞表达 HIF-1α可能具有调控作用。（2）Rac1和 HIF-1α 在 CNV 组织中存在高表达，且二者表达密切相关，说明在 CNV 的形成过程中，Rac1和 HIF-1α 起着一定的作用。Rac1有可能成为早期CNV药物治疗的靶点。
创新点：Rac1和 HIF-1α 在新生血管的生成中起着重要的作用，且二者在脉络膜新生血管形成早期呈显著相关，同类研究在国内外尚未见报道。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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