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人晶状体上皮细胞体外培养方法改良与观察 |
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作者:彭瑞萍 吴… 文章来源:广州 中山大学中山眼科中心 先烈南路54号 510060 点击数:3539 更新时间:2007/6/22 9:52:10
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【目的】 建立一种简便易操作的人晶状体上皮细胞系的培养方法,建立稳定的原代培养模型。
【方法】 取眼库眼和胚胎眼晶状体,前囊膜向下置于培养皿中,用撕囊镊和显微无齿镊把后囊膜由中心等分撕开,近五角星状铺于培养皿中,轻轻捧出其内皮质与核,滴加1滴培养液湿润。取盖玻片盖于其上使其不会卷曲,加培养液覆盖2~3mm,第二天贴壁牢固后取出盖玻片。细胞爬出融合后可取出囊膜重新铺片培养,原培养皿中细胞予以传代。
【结果】 铺片2d后可见细胞活化生长趋势,3d明显有细胞爬出,增殖明显且部分跳跃式生长,保持上皮细胞形态。5d左右细胞在囊膜周围融合,可消化传代。4~5代后细胞衰老,体积变大,增殖逐渐停滞,表现成纤维细胞形态。
【讨论】 保留晶体囊膜作为基质可以促进上皮细胞的活化,促进增殖。细胞增殖能力与供体年龄紧密相关,胚胎眼的晶体上皮细胞增殖能力和细胞形态上更为理想。另一决定条件是取材后间隔时间,2~3小时最佳,超过20h的眼库眼培养效果不佳。
【结论】 成功改进了晶状体上皮细胞的原代培养模型,减少操作过程对细胞的损害,为研究后发性白内障机理和抑制晶体上皮细胞增殖提供了稳定的研究方法。
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会议投稿录入:aya610 责任编辑:毛进 |
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