重组质粒pRNAT-U6.1/CBF siRNA的构建、鉴定及其对ECV-304细胞增殖的影响 仝欢(研究生)尚庆丽 马景学 目的：构建针对补体因子B基因的小干扰RNAi(siRNA)重组质粒，观察其对ECV-304细胞增殖的影响。方法：构建重组质粒pRNAT-U6.1/CBF siRNA,鉴定后将其转染入ECV-304细胞为B因子RNAi组；将等量空质粒转染入ECV-304细胞为空载体组；未转染细胞为对照组。观察GFP表达及转染效率；半定量RT-PCR测定B因子mRNA表达，并进行灰度值分析；MTT及流式细胞仪检测。结果：所获得的目的片段序列与B因子基因完全相符。荧光显微镜下B因子RNAi组和空质粒组ECV-304细胞均可见清晰的绿色荧光。半定量RT-PCR分析B因子RNAi组B因子mRNA表达水平显著降低，空载体组和对照组B因子mRNA表达量较高，且三组比较差异有显著性（p<0.05）。MTT显示B因子RNAi组在24 h，48 h，72 h的抑制率为23.5% , 33.5% , 40.8% ,而空载体组对ECV-304细胞生长没有影响。流式细胞仪显示B因子RNAi的抑制作用主要在G1期；对照组、B因子RNAi组处于G1期的细胞数占总细胞数的比率分别是27.9%，44.4%。结论：ECV-304的生长可以被重组质粒pRNAT-U6.1/CBF siRNA有效抑制。
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