| 不同浓度A2E对离体猪RPE细胞的影响观察 黄琛 陈晓勇 李颖 王薇 北京大学第三医院眼科中心，北京海淀区花园北路49号，100083 目的:评价体外合成的A2E对猪视网膜色素上皮(RPE)细胞的细胞毒性，为研究A2E在RPE细胞相关疾病的作用提供细胞模型。方法: 利用全反式视黄醛和乙醇胺体外合成脂褐质荧光基团A2E，RP-HPLC分析A2E异构化程度。不同浓度的A2E(50,75,100μmol/L)作用第3代猪RPE细胞30，45，60，90分钟，换完全培养液孵育24小时后，倒置荧光显微镜观察荧光强度，IPP 6.0软件灰度扫描定量荧光强度。采用MTT法检测A2E作用细胞各时间段的吸光度值，SPSS 11.0 软件进行统计学分析，评价A2E的细胞毒性及RPE细胞活性。结果: 在室温、室内光线下体外合成的A2E发生异构化，形成A2E:iso-A2E=4：1的平衡状态。A2E被RPE细胞摄取后主要分布于细胞核周围，具有自发荧光。MTT实验及荧光灰度扫描结果显示，不同浓度的A2E被细胞摄取后细胞活力和荧光灰度扫描结果不同，以50μmol/L浓度A2E作用RPE细胞60分钟时，细胞内荧光强度最强且细胞活力最佳。结论: 体外培养的猪RPE细胞摄取体外合成50μmol/L A2E 60分钟后细胞对A2E的摄取较多，A2E对细胞的毒性相对较低，该条件下进行A2E对离体猪RPE细胞的研究较好。 |
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