不同发育阶段视网膜神经前体细胞分化特性的比较
孙雪荣,葛坚,江儒章,张跃红,段永恒,高前应,黄冰,祈颖
中山大学中山眼科中心 眼科学国家重点实验室
目的:比较不同发育阶段视网膜神经前体细胞的增殖分化特性,为寻求合适种子细胞奠定基础
方法:培养不同发育阶段的小鼠视网膜神经前体细胞(RPC),用BrdU掺入法检测有丝分裂百分率,用realtime qPCR检测视网膜发育相关基因的表达,用免疫荧光检测Brn3b和Thy1.1的百分率
结果:悬浮培养的E13.5 RPC和E17.5 RPC生长良好,加入BrdU 24hs后,E13.5 RPC的标记率明显高于E17.5 RPC。RT-PCR显示,新鲜取材的E13.5 RPC和E17.5 RPC均表达Pax6, Rx, Math5, Brn3b, NFL和Islet1等视网膜发育相关基因。贴壁3d后,Brn3b, NFL和Islet1等神经节细胞相关基因在E17.5 RPC显著下调,而在E13.5 RPC下调不明显。免疫荧光显示,贴壁3d后E13.5 RPC表达Brn3b和Thy1.1的百分率均高于E17.5 RPC
结论:与E17.5 RPC比较,E13.5 RPC向视网膜神经节细胞分化的效率更高
本课题受973计划(2007CB512200)和国家自然科学基金(30672275)资助 |