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| 三种非病毒性转基因法体外转染雪旺细胞的对比研究 |
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作者：方媛 文章来源：上海市复旦大学眼耳鼻喉科医院眼科 点击数：1102 更新时间：2008/2/13 
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目的：比较电穿孔法、阳离子法、脂质体法三种非病毒性转基因法体外转染雪旺细胞在转染率、细胞活性、目的蛋白表达等的差异，找出适合体外转染雪旺细胞的方法。方法：分别采用电穿孔法、阳离子法、脂质体法转染GFP质粒到雪旺细胞，转染后24h、48h、3天，7天，14天时观察绿色荧光的表达情况，并经Hochest染核后计算转染率。在转染后24h，用台盼蓝染色计数细胞死亡率，以观察基因转染对细胞活性的影响。在转染后24h，3天，7天收集转基因雪旺细胞行western blot，比较绿色荧光蛋白含量。结果：雪旺细胞在电穿孔后转染率高达90％，绿色荧光表达可持续至7天，脂质体法转染后转染率为20％，持续时间约3天。阳离子法转染后细胞转染率为15％，持续时间约3天。电穿孔法、阳离子法和脂质体法细胞死亡率分别为50％、5％和3％。Western blot显示电穿孔法所转染雪旺细胞的绿色荧光蛋白含量明显高于另外两组。结论：电穿孔法转染体外培养的雪旺细胞具有很高转染率且表达时间较长，明显优于脂质体法和阳离子法；但细胞活性受电穿孔法的影响更大。综合比较，推荐电穿孔法作为较适宜的非病毒方法体外基因转染雪旺细胞。本研究受国家自然科学基金（30300379）资助。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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