BIGH3基因R124C定点突变及真核表达载体的构建
作者 尚巍 殷秀丽 付安安 陈樱 葛红岩 黑龙江省哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院（哈尔滨市邮政街23号）邮编150001[摘要] 目的 对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R124C进行体外定点诱变研究，并构建携带有BIGH3基因突变的真核表达载体。方法 以含有BIGH3基因的克隆载体pMD18-T/BIGH3为模板，分别设计1对背对背引物，采用快速PCR定点突变技术扩增。通过双酶切将突变的BIGH3片段插入到PCI载体上，经PCR、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。结果 DNA测序表明,在预期位点已经发生突变,BIGH3基因在第370密码子由精氨酸(R)突变为半光氨酸(C)成功实现定点突变。结论 快速PCR定点突变技术诱导定点突变,准确、高效、简便，BIGH3突变子真核表达载体的pCI/R124C-BIGH3的成功构建,为进一步进行该突变的结构与功能研究奠定了基础。
[关键词] BIGH3; 聚合酶链反应; 定点突变; 角膜营养不良; 角膜上皮蛋白; 真核表达
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