目的：探讨分离、培养人胚胎光感受器前体细胞（retinal photoreceptor progenitors）的方法，比较表皮细胞生长因子联合碱性成纤维细胞生长因子（EGF+bFGF）和视黄酸（retinoic acid）诱导RPP的效果。
方法：获取12周龄人胚胎眼球，采用1U/ml的木瓜蛋白酶和0.02%EDTA联合消化神经层视网膜，轻度震荡获得悬液，Nueralbasal培养基培养RPP细胞，视锥-视杆同源盒CRX基因 (cone-rodhomeobox-con-taininggene)基因和碱性亮氨酸拉链转录因子(basic motif–leucine zipper transcription factor)对RPP细胞进行鉴定。细胞诱导试验分组①AC组；②EGF+bFGF组；③对照组。诱导2天后分别行rod-opsin的免疫荧光和实时定量PCR(RT-PCR)检测，比较诱导效果。
结果：体外培养的RPP细胞胞体较小，呈典型的单突起生长，CRX和NRL鉴定，纯度达到89%。AC诱导组rod-opsin阳性细胞数明显高于EGF+bFGF组（P<0.01）,RT-PCR检测也支持这一结果。
结论：采用特殊的消化方法可以获得纯度极高的人RPP细胞，AC能有效促进RPP的成熟。 |
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