siNgR重组质粒载体构建及效应检测
陈春林 叶剑 尹小磊 陈小璠
重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科 400042
目的：构建具有特异阻断大鼠NgR基因功能的siRNA表达系统,为视神经损伤基因治疗提供新的方法。方法：根据Genbank提供的NgR基因mRNA序列, 应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸, 化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列, 退火、克隆到经Bgl Ⅱ、Hind Ⅲ酶切处理的pSUPER-EGFP1质粒, 获得重组siNgR质粒, 用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定, 最后将构建的表达载体转染SD大鼠体内视网膜神经节细胞，免疫印迹法观察对NgR蛋白表达的影响。结果：酶切和序列测定表明, 成功构建了siNgR表达载体, 免疫印迹实验显示，此载体能够抑制视神经内NgR蛋白表达。结论：本研究构建的siRNA 表达载体, 具有阻断NgR基因的表达的功能, 为进一步研究视神经损伤基因治疗打下基础。
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