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RNA干扰技术打靶ILK激酶体外抑制血管形成的研究 |
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RNA干扰技术打靶ILK激酶体外抑制血管形成的研究 |
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作者:于文贞 文章来源:北京市西直门南大街11号 北京大学人民医院眼科 点击数:1946 更新时间:2008/2/14
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RNA干扰技术打靶ILK激酶体外抑制血管形成的研究
于文贞 郭丽莉 黎晓新
北京大学人民医院眼科 西直门南大街11号 100044
目的:探索用RNA干扰技术下调ILK激酶的表达对体外新生血管形成的影响。
方法:化学合成靶向ILK的siRNA, 转染体外培养RF/6A细胞,同时以对任何基因均无作用的siRNA作为阴性对照。以实时定量PCR技术检测ILK mRNA表达水平,免疫印迹法检测ILK蛋白表达水平。转染后48 h用免疫荧光技术分析ILK下调对细胞微丝结构的影响, 用Boyden chamber方法测定细胞迁移,用流式细胞技术测定细胞周期和凋亡的影响, ELISA方法检测VEGF的表达,同时分析ILK抑制后内皮细胞形成毛细血管样结构形成的影响。
结果:转染靶向ILK的siRNA后,内皮细胞的mRNA和蛋白表达明显受到抑制,与对照相比,细胞的迁移明显抑制(p<0.05),细胞凋亡增加,细胞分裂周期受阻,同时也干扰了细胞内F-actin的表达与构像,降低了毛细血管样结构的形成。
结论: 打靶ILK可以抑制血管内皮细胞体外形成毛细血管样结构的形成。
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会议投稿录入:毛进 责任编辑:毛进 |
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