RNA干扰技术打靶ILK激酶体外抑制血管形成的研究
于文贞 郭丽莉 黎晓新
北京大学人民医院眼科 西直门南大街11号 100044
目的：探索用RNA干扰技术下调ILK激酶的表达对体外新生血管形成的影响。
方法：化学合成靶向ILK的siRNA, 转染体外培养RF/6A细胞，同时以对任何基因均无作用的siRNA作为阴性对照。以实时定量PCR技术检测ILK mRNA表达水平，免疫印迹法检测ILK蛋白表达水平。转染后48 h用免疫荧光技术分析ILK下调对细胞微丝结构的影响, 用Boyden chamber方法测定细胞迁移,用流式细胞技术测定细胞周期和凋亡的影响, ELISA方法检测VEGF的表达,同时分析ILK抑制后内皮细胞形成毛细血管样结构形成的影响。
结果：转染靶向ILK的siRNA后，内皮细胞的mRNA和蛋白表达明显受到抑制，与对照相比，细胞的迁移明显抑制(p<0.05)，细胞凋亡增加，细胞分裂周期受阻，同时也干扰了细胞内F-actin的表达与构像,降低了毛细血管样结构的形成。
结论: 打靶ILK可以抑制血管内皮细胞体外形成毛细血管样结构的形成。
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