诱导人羊膜上皮细胞培养角膜上皮进行角膜重建的研究
周清1，陈剑1 ，刘小勇1，徐锦堂2
(暨南大学1附属第一医院眼科, 2医学院眼科研究室, 广东广州510630)
【摘要】 目的：通过体外诱导人羊膜上皮细胞分化培养复层角膜上皮进行角膜重建的研究，探讨人羊膜上皮细胞作为眼表角膜上皮种子细胞的可能性。方法：取健康人足月产羊膜，通过胶原酶II、胰蛋白酶消化获得羊膜上皮细胞，将细胞接种于含10%胎牛血清和10ng/ml上皮生长因子的DMEM培养基中培养扩增、传代，将2-3代羊膜上皮细胞，接种于去上皮的兔带角膜缘角膜浅层基质片上培养，待羊膜上皮细胸融合形成单层后，置于插入式培养皿中进行气液界面培养14天。对体外构建“人羊膜上皮细胞－兔角膜基质”组织工程角膜进行形态学、超微结构观察以及免疫组织化学检测；并将“人羊膜上皮细胞－兔角膜基质”组织工程角膜用于角膜缘干细胞缺陷症动物的眼表重建，术后观察其疗效2周。结果：人羊膜上皮细胞可在角膜基质上生成，培养1-2天可形成单层，气液界面培养１4天可形成4-5层细胞的复层上皮，免疫组化检测复层细胞表达角蛋白12，所形成的复层结构与正常角膜上皮极为相似。用于动物实验后见植片存活、透明，成功重建兔眼表角膜上皮。结论：人羊膜上皮细胞有可能取代角膜缘干细胞用于眼表角膜上皮重建。
【关键词】羊膜；角膜；上皮细胞；气-液界面培养法；组织工程
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