| 目的：研究兔角膜内皮细胞的体外培养方法，培养基的选择和免疫组化特性。方法：采用不同培养方法和多种培养基体外培养兔角膜内皮细胞，观察细胞的贴壁、生长、形态等生长特性，计算贴壁率和分裂时间等生长数据。采用免疫组化方法鉴定角膜内皮细胞。结果：显微分离后弹力层及内皮细胞层联合延迟消化培养法较即时消化培养法成功率高。DMEM、F12、 和 DMEM/F12（1:1）在细胞贴壁率，分裂时间，和汇合时间没有明显差异，但DMEM/F12（1:1）贴壁时间较明显缩短。RPMI-1640不适合兔角膜内皮细胞的培养。兔角膜内皮细胞免疫组化染色结果NSE染色呈强阳性,波形蛋白和角蛋白染色弱阳性。结论：兔角膜内皮细胞培养宜采用显微分离后弹力层及内皮细胞层联合延迟酶消化培养法，培养液采用DMEM/F12（1:1），原代培养加入20%小牛血清，传代培养加入10%小牛血清。细胞贴壁，存活，增殖均满意，细胞可传5-6代，而且无成纤维细胞的污染，满足绝大多数实验的需要。 |
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