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| 实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中T-bet的表达及其意义 |
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作者：褚利群 杨… 文章来源：中山大学中山眼科中心 510060 点击数：2529 更新时间：2004/6/5 
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| 目的 研究实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）中T-bet的表达及其与Th细胞分化的关系。
方法 从牛眼提取视网膜S抗原，利用视网膜S抗原与福氏完全佐剂免疫Lewis大鼠诱导EAU动物模型。分别摘取正常组和免疫后7、12、15、21天大鼠的眼球、脾脏，制作虹膜、视网膜、巩膜-脉络膜复合体平片和眼、脾脏石蜡连续切片。应用T-bet和CD4单克隆抗体，对平片和切片进行免疫组织化学染色。从正常组和免疫后7、12、15、21天Lewis大鼠的脾脏中提取总RNA和总蛋白，利用RT-PCR和western blot检测T-bet mRNA和蛋白的表达。摘取免疫后15天的视网膜、脾脏和腹股沟淋巴结，制备单细胞悬液，在有和没有S抗原的刺激下培养72小时，检测培养上清中IFN-γ、IL-2和 IL-4的含量，检测细胞增殖反应和T-bet mRNA和蛋白的表达。摘取正常组和免疫后7、12、15、21天Lewis大鼠的视网膜细胞、脾细胞和腹股沟淋巴结细胞，或将来自免疫后15天的上述细胞培养72小时后，利用双色流式细胞术检测T-bet和CD4的表达。
结果 利用自行提取的视网膜S抗原可诱导出临床可见的稳定的EAU模型，在此基础上揭示出正常虹膜、视网膜和脾组织中均见少量T-bet表达，免疫后7天T-bet的表达增加，15天达高峰，免疫后21天时表达显著降低。体外实验结果显示，在S抗原的刺激下，T-bet 的表达明显增高，同时伴随着细胞增殖能力的提高和大量Th1类细胞因子产生。双色流式细胞术结果显示，正常视网膜、脾脏和腹股沟淋巴结中有少量T-bet的表达，免疫后7天T-bet的表达增加，免疫后15天达高峰， 21天时表达显著降低，T-bet+CD4+/CD4+的比率也随炎症进展而显著提高。在S抗原的刺激下，免疫后15天的视网膜细胞、脾细胞和腹股沟淋巴结细胞中T-bet+细胞显著增加，同时T-bet+CD4+/CD4+的比率也显著提高。
结论 EAU的发病前及发过程中始终伴随着T-bet表达的增高，且其变化规律与炎症的病情一致，T-bet表达的上调伴随着Th1细胞的活化。S抗原的刺激可以活化T-bet的表达，并使Th的分化向Th1方向偏移。T-bet表达可能在EAU的发病中起着重要作用，其作用可能是通过激活Th1细胞而实现的。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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