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    应用内源外源方法共同确定PAX6基因的有效RNA干扰靶点         
    应用内源外源方法共同确定PAX6基因的有效RNA干扰靶点
    作者:黄悦 文章来源:天津医科大学眼科中心 点击数:1509 更新时间:2008/1/20
    目的:寻找有效的PAX6基因干扰靶点
    材料:融合质粒载体系统,293T细胞,慢病毒载体系统,HLE-B3
    方法:外源检测系统:构建表达PAX6蛋白的红色荧光蛋白融合质粒,用该质粒感染293T细胞,构建PAX6外源表达模型;寻找4个PAX6候选干扰靶点,并构建4个PAX6干扰质粒及一个阴性对照质粒,用该质粒转染表达外源PAX6的293T细胞,western blot检测PAX6蛋白表达情况,确定有效的干扰靶点;内源检测系统:在已构建的质粒载体系统上,相应构建4个PAX6干扰慢病毒载体及一个阴性对照病毒载体,并感染内源表达PAX6的HLE-B3细胞,western blot检测PAX6蛋白表达情况,选择有效的PAX6干扰慢病毒,确定有效的干扰靶点,与外源结果进行比较。
    结果:外源结果显示,4个PAX6基因干扰候选靶点中的3个有效,这与内源结果相一致。
    结论:内源外援方法共同找到并确定了3个有效的PAX6干扰靶点。
    会议投稿录入:毛进    责任编辑:毛进 
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