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| 应用内源外源方法共同确定PAX6基因的有效RNA干扰靶点 |
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作者：黄悦 文章来源：天津医科大学眼科中心 点击数：1418 更新时间：2008/1/20 
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目的：寻找有效的PAX6基因干扰靶点
材料：融合质粒载体系统，293T细胞，慢病毒载体系统，HLE-B3
方法：外源检测系统：构建表达PAX6蛋白的红色荧光蛋白融合质粒，用该质粒感染293T细胞，构建PAX6外源表达模型；寻找4个PAX6候选干扰靶点，并构建4个PAX6干扰质粒及一个阴性对照质粒，用该质粒转染表达外源PAX6的293T细胞，western blot检测PAX6蛋白表达情况，确定有效的干扰靶点；内源检测系统：在已构建的质粒载体系统上，相应构建4个PAX6干扰慢病毒载体及一个阴性对照病毒载体，并感染内源表达PAX6的HLE-B3细胞，western blot检测PAX6蛋白表达情况，选择有效的PAX6干扰慢病毒，确定有效的干扰靶点，与外源结果进行比较。
结果：外源结果显示，4个PAX6基因干扰候选靶点中的3个有效，这与内源结果相一致。
结论：内源外援方法共同找到并确定了3个有效的PAX6干扰靶点。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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