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20S蛋白酶体在视网膜色素上皮细胞衰老过程中的变化         
20S蛋白酶体在视网膜色素上皮细胞衰老过程中的变化
作者:李越 文章来源:第四军医大学西京医院眼科 点击数:3088 更新时间:2008/1/22
20S蛋白酶体在视网膜色素上皮细胞衰老过程中的变化
李越,王雨生,惠延年*
第四军医大学西京医院眼科,710032
关键词:蛋白酶体,视网膜色素上皮细胞,衰老
目的:检测原代培养的人RPE复制衰老过程中20S蛋白酶体活性、含量、细胞内定位及表达的变化。方法:体外培养的人RPE按传代次数选择“幼”、“中”和“老”三组细胞,XTT法、β-半乳糖苷酶染色和自发荧光检测细胞衰老状态;对RPE中的20S蛋白酶体,利用产荧光底物检测活性;PCR法检测主要亚基表达水平;免疫荧光法检测20S蛋白酶体和氧化蛋白质在RPE中的分布和含量。结果:体外培养人RPE表现出逐渐衰老的特征。20S蛋白酶体的PGPH活性和CT-L活性随着RPE老化降低,“老”组与其他二组比较分别具显著差异。“幼”组20S蛋白酶体以细胞核内水平最高;“中”和“老”组以核周区含量最高。细胞内氧化蛋白质分布在“幼”和“中”组以核周区含量最高;而“老”组以核内最高,这与该组细胞核内20S蛋白酶体水平降低有关。三组中20S蛋白酶体主要活性亚基表达水平无显著差异。结论:氧化损伤蛋白质在细胞内聚集被视为衰老标志,20S蛋白酶体是细胞内降解氧化受损蛋白质的主要系统。体外培养人RPE的衰老过程中观察到20S蛋白酶体活性降低和细胞内分布的改变。这一活性的降低与细胞内20S蛋白酶体的含量和表达水平改变无关,可能是蛋白酶体受抑制引起的。
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