| 目的 应用转基因技术体外培养稳定表达人血小板源性生长因子B（PDGF-B）的猫角膜内皮细胞，并将其移植到羊膜载体,使其形成连续规则的单层内皮细胞，为转基因角膜内皮细胞载体移植作准备。方法 从健康产妇胎盘组织中提取总RNA，通过RT-PCR方法，扩增出PDGF cDNA,将其插入真核表达载体PcDNA4构建成重组真核表达载体PcDNA4/PDGF-B, 应用脂质体介导法转染猫角膜内皮细胞，G418筛选稳定克隆，传代接种于羊膜载体上，培养2周。于倒置相差显微镜下观察转染PcDNA4/PDGF-B的猫角膜内皮细胞生长情况，用免疫组织化学染色法和半定量RT-PCR法检测PDGF在猫角膜内皮细胞中的表达情况，用扫描电镜观察转染PcDNA4/PDGF-B的猫角膜内皮细胞在羊膜上的生长情况。结论 应用转基因技术可体外培养稳定表达PDGF的猫角膜内皮细胞,并移植到羊膜载体形成稳定单层，为转基因人及动物角膜内皮细胞的细胞移植的研究打下基础。 |
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