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miRNA芯片检测高糖环境下人视网膜血管内皮细胞miRNA的差异表达         ★★★
miRNA芯片检测高糖环境下人视网膜血管内皮细胞miRNA的差异表达
作者:吕红彬  … 文章来源:四川省 泸州医学院附属医院眼科 646000 点击数:750 更新时间:2011/5/13 11:58:00
目的 应用miRNA芯片技术筛选高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(Human retinal capillary endothelial cells, HRCECs)差异表达的miRNA,并预测部分差异表达的miRNA调控的靶基因,为进一步探讨miRNA在糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy, DR)发病机制中的作用打下基础。方法 常规培养HRCECs,用高糖作为刺激因子,用In Situ Cell Death Detection 试剂盒对细胞进行凋亡检测;提取细胞的总RNA并进行质检;miRNA芯片检测差异表达的miRNA,并用实时定量PCR对部分差异表达的miRNA进行验证,运用生物信息学方法预测它们可能调控的靶基因。结果 miRNA芯片结果显示与正常对照组相比,在高糖组一共筛选出49个差异性表达的miRNAs(上调>2倍或下调<0.5倍),其中表达上调的31个,表达下调的18个。对表达上调的has-miR-320c和has-miR-29a*进行实时定量PCR检测,表达趋势与芯片结果一致,靶基因预测结果表明这些差异表达的miRNA作用靶点非常广泛,其中涉及到不少生长因子和蛋白。结论 运用miRNA芯片技术发现部分miRNA在高糖刺激下的HRCECs中存在差异表达,它们可能通过调控其靶基因参与DR的发生发展。 基金项目:四川省教育厅基金(08ZA092),2009年泸州医学院重点项目 作者单位:646000 泸州医学院附属医院眼科 通讯作者:吕红彬(Email: oculistlvhongbin@163.com)
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