目的 通过对中国汉族人群2型糖尿病合并增殖性糖尿病性视网膜病变(PDR)患者玻璃体液比较蛋白质组学的研究,筛选PDR患者玻璃体液中特异分子标志物,探讨DR的发生、发展、及可能的消退机制。并对候选的玻璃体差异蛋白进行进一步功能研究,寻找具有价值的干预性治疗的靶分子。
方法 收集PDR患者玻璃体样本和正常人死亡后捐献眼新鲜玻璃体样本,采用荧光差异双向凝胶电泳(2D-DIGE)技术构建玻璃体液样本的2D-DIGE图谱,通过DeCyder 2-D差异分析软件,筛选PDR患者玻璃体液中差异表达的蛋白点。对筛选的差异蛋白点自凝胶中切下后行胰酶酶解,进行基质辅助激光解吸电离/飞行时间-飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得肽质量指纹图(PMF)。通过MASCOT软件进行肽段的鉴定,并将鉴定出的蛋白质输入Swiss-Prot数据库,获得相关蛋白的基本生物信息学数据。实验结果用均数和标准差( )表示,组间统计学分析采用非配对t检验,参数统计采用重复测量的方差分析,以P<0.05表示差异显著。
结果 成功获得2型PDR患者和正常人捐献眼的玻璃体液蛋白2D-DIGE图谱。在PVR和捐献眼玻璃体中分别鉴定到236和54个蛋白质点,在 21个明显差异蛋白质中成功的鉴定到 6种蛋白质。其中PVR组上调的有4种蛋白,分别是α2 -锌糖蛋白、载脂蛋白A1、载脂蛋白H和补体C3;下调的有2种蛋白,分别是视黄醇结合蛋白和色素上皮源性生长因子;捐献眼和 PVR眼玻璃体没有发现共有的蛋白质。
结论 应用2D-DIGE联合MALDI-TOF-TOF MS技术对2型PVR患者玻璃体液进行比较蛋白组学分析是准确可行的,本研究提示 PVR 是一个复杂的病理过程,证实了 PVR 的病程中存在血-视网膜屏障的破坏、细胞免疫反应参与以及玻璃体的能量代谢障碍等,这些差异蛋白的识别有助于PVR发病机制的深入探索。 |