目的  研究胰岛素对牛视网膜微血管内皮细胞活性氧产生，VEGF表达的作用及其机制，NAD(P)H 氧化酶抑制剂apocynin和多种抗氧化剂对此作用的影响，探索预防糖尿病早期强化胰岛素治疗引起糖尿病性视网膜病变短期恶化的方法。
方法  牛视网膜微血管内皮细胞培养在5mM或30mM糖浓度下3天，给予100nM胰岛素作用24小时或先给予1mmol/L apocynin，100 μmol/l PI3-K 抑制剂 LY294002，50 μM P42/44 MAPK 抑制剂 U0126，2 μM PKC 抑制剂 GF109203X，250 U/ml过氧化氢酶，100μg/ml 维生素C，100μmol/L a-硫辛酸 和 50μmol/L 维生素E作用后再给予胰岛素作用24小时。细胞活性氧的产生通过激光共聚焦和流式细胞仪检测，超氧阴离子通过细胞色素C还原法检测，VEGF蛋白通过ELISA法检测。
结果  100nM胰岛素或30mM高糖显著增加了细胞内活性氧的产生（P<0.05, two-way ANOVA）。Apocynin 和 LY294002 减少了胰岛素诱导的超氧阴离子的产生（P<0.05, one-way ANOVA），而GF109203X nor U0126则对胰岛素诱导的超氧阴离子的产生无影响（P>0.05, one-way ANOVA）。抗氧化剂维生素C，a-硫辛酸和维生素E亦可显著减少胰岛素诱导的超氧阴离子的产生（P<0.05, one-way ANOVA）。此外，外源性H₂O₂增加了BRECs VEGF蛋白表达，过氧化氢酶抑制了胰岛素诱导的VEGF蛋白表达。
结论  体外胰岛素通过NAD(P)H，PI3-K 通路诱导BRECs ROS产生增加，ROS可以调节胰岛素诱导的VEGF表达。而抗氧化剂维生素C，a-硫辛酸和维生素E可减少胰岛素诱导的ROS产生。因此，在糖尿病早期强化胰岛素治疗的同时给予抗氧化剂可能减轻糖尿病视网膜病变的短期恶化。