目的 鳞状上皮化生是发生在严重眼表疾病的一种主要病理改变,本研究通过空气暴露培养人结膜组织,建立结膜鳞状上皮化生体外模型,探讨羊膜对结膜鳞状上皮化生的影响及其作用机制。
方法 在体外空气暴露条件下培养人正常结膜组织或人正常结膜组织与羊膜共连续培养4天, 8天或12天,应用K10,MUC5AC,Pax6,Ki67和p63检测培养后结膜上皮的分化和增殖状态,同时对p38MAPK信号通路和Wnt信号通路相关蛋白p-p38,β-catenin和p-β-catenin进行免疫染色检测。
结果 在体外空气暴露条件下,结膜鳞状上皮化生被成功诱导:上皮层次明显增加,K10大量阳性表达, Ki67、p63表达明显上调,MUC5AC和Pax6表达明显下调或消失。与单纯结膜组相比,在与羊膜共培养组中,结膜上皮细胞的异常分化和增殖同时被明显抑制。同时发现p38MAPK信号通路和Wnt信号通路在结膜鳞状上皮化生过程中被明显活化:p-p38表达明显上调,β-catenin在细胞核阳性表达和p-β-catenin表达明显下调,但在与羊膜共培养的结膜组织中,p38MAPK和Wnt激活信号均明显下调。
结论 体外空气暴露培养人结膜组织能成功诱导出结膜鳞状上皮化生。羊膜能有效抑制结膜鳞状上皮化生,同时羊膜抑制结膜鳞状上皮化生可能与其抑制p38MAPK和Wnt信号通路的活化相关,这是羊膜一种全新的生物活性,将为临床鳞状上皮化生性疾病的防治开辟新的途径。 |