目的 探讨依托萡甙对视网膜母细胞瘤细胞表达B7-H1的影响及相关分子生物学机制。
方法 用浓度为0,2.5,5,10,20,40μg/ml 的依托萡甙处理Y79细胞24h,RT-PCR、荧光定量PCR和流式细胞术检测B7-H1的表达;Western blot检测此过程中丝裂原激活蛋白激酶信号途径(ERK/JNK/P38)的磷酸化水平;进一步使用信号途径抑制剂研究细胞表达B7-H1过程中丝裂原激活蛋白激酶信号途径的作用。采用以质粒为载体的针对B7-H1的siRNA转染细胞,观察siRNA对细胞表达B7-H1的影响。
结果 RT-PCR和荧光定量PCR显示,5μg/ml浓度的依托萡甙对Y79细胞表达B7-H1 mRNA的刺激作用最强;流式细胞术检测B7-H1蛋白表达与mRNA趋势相同;Western blot检测显示在此过程中存在ERK1/2的磷酸化激活,ERK1/2抑制剂-U0126可以抑制B7-H1的表达;以质粒为载体的针对B7-H1的siRNA可以抑制依托萡甙对Y79细胞表达B7-H1的刺激作用。
结论 依托萡甙促进Y79细胞表达B7-H1 mRNA和蛋白,ERK1/2信号通路的磷酸化激活与此过程有关;siRNA可以抑制依托萡甙对Y79表达B7-H1的刺激作用。 |