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小鼠视网膜组织块培养           ★★★
小鼠视网膜组织块培养
作者:孙靖 文章来源:天津医科大学眼科中心白内障科 点击数:315 更新时间:2011/9/13
目的  建立小鼠视网膜组织块培养方法,为体外研究视网膜色素变性奠定基础。
方法  实验研究。出生后10天C57BL/6 野生型和视网膜色素变性(rd1)小鼠各10只断颈取眼球,0.5%蛋白酶K消化15min;自角巩膜缘剪开眼球,去除眼前节和玻璃体,分离视网膜并在视网膜边缘作2对放射状切开;转移视网膜至细胞培养小室(costar transwell),并尽量铺平后放置于培养板中,加入不含血清R16培养液,以不引起视网膜组织块漂浮为宜;隔天半量换液。分别于培养1、2周行recoverin免疫组织化学检测。
结果  视网膜组织接种24h即完全贴壁,视网膜色素上皮细胞自组织块边缘往外生长。培养1~2周,大部分组织块保持透明。Recoverin免疫组织化学表明,体外培养野生型小鼠视网膜感光细胞保持完好,rd1小鼠视网膜感光细胞变性速度在体外明显延缓,具体机制尚需进一步研究。
结论  组织块法培养小鼠视网膜可保持活性至少2周,为体外研究各种细胞因子及干细胞移植治疗视网膜色素变性奠定了基础。
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