目的 研究折叠式人工玻璃体(FCVB)体外缓释鼠源性神经生长因子(NGF)对视网膜神经节细胞的作用。
方法 体外培养RGC-5细胞系,应用动态压力培养系统建立RGC-5压力凋亡模型,通过Hoechst 33258染色及Annexin V-PI染色流式细胞仪检测压力培养条件下RGC-5细胞的凋亡比率;将15ug/ml的NGF注入FCVB,收集FCVB 在加压和不加压状态下,不同时间点体外缓释NGF的含量,ELISA法检测样品中NGF的浓度。并检测缓释的NGF对压力致凋亡模型中RGC-5的作用。
结果 压力致凋亡模型中RGC-5凋亡比率随着压力增加而增加,40mmHg下24h RGC-5凋亡比率为40.78±9.07% (n=18)。FCVB能够物理缓释NGF,并且缓释浓度呈现时间依赖性,15ug/ml的NGF注入FCVB,于30min、1h 、2h、3h、4h、5h、6h和24h时分别缓释出NGF 18ng/ml,21 ng/ml,26ng/ml,35 ng/ml,41 ng/ml,58 ng/ml、92 ng/ml和161 ng/ml。持续加压40mmHg时,FCVB在压力系统中在上述同样时间点分别缓释出NGF 73 ng/ml,81ng/ml, 109 ng/ml,131 ng/ml,192 ng/ml,210 ng/ml、229 ng/ml和317 ng/ml。缓释的NGF对40mmHg下RGC-5凋亡比率在24h比对照组减少11.31±2.69% (n=3, P<0.05)。
结论 FCVB能够物理缓释NGF,并且缓释浓度呈时间依赖性增长。缓释的NGF对细胞凋亡具有保护作用。 |