目的 探讨人眼Tennon’s囊成纤维细胞是否能重编程为多潜能干细胞(iPS)。
方法 取原代人眼Tennon’s囊成纤维细胞作为研究对象，Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4四个因子质粒hpMXs转化感受态大肠杆菌，hpMXs质粒扩增，使用Invitrogen Purelink 质粒纯化系统进行质粒DNA提取，以FB-GP,FB-VSVG为包装质粒，通过三质粒转染系统共转染包装细胞293FT以生成逆转录病毒，逆转录病毒收集、浓缩及感染靶细胞（平行设计空白组pMXs-GFP作为对照组）。细胞感染24h后收集病毒上清，并换用新鲜DMEM培养24h，再次收集病毒上清，两次收集的病毒上清用Millipore超滤管行浓缩。病毒感染人眼Tennon’s囊成纤维细胞后5-6d细胞长至融合，用胰酶消化传代至MMC处理过的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层上，8-10d后换用hES培养液,每天换液观察。感染后14-17天在镜下挑选iPS样克隆并转移到含MMC-MEF的12 well板，每孔一个克隆。6-7d后传代，克隆贴壁后行TRA-1-60活细胞免疫荧光染色，挑选阳性克隆。
结果 1. 扩增提取的四因子hpMXs质粒琼脂糖凝胶电泳条带位置与分子量大小相符，四种质粒测序结果与genebank序列比对配比率大于99%。 2. 在荧光显微镜下发现通过三质粒转染系统及超滤管病毒浓缩后，对照组pMXs-GFP转染效率很高。 3. 病毒感染人眼Tennon’s囊成纤维细胞3d左右可见细胞形态改变，随后逐渐明显。 4. 病毒感染后8-10左右形成colony,以后colony逐渐增大，但大部分colony呈现部分重编程及分化样形态，只有少数colony呈现iPS colony样外观:扁平的单层，边清晰，colony内的细胞呈蜂窝状，胞核与胞质比增大。
结论 已有大量研究表明多种细胞可重编程为iPS，本研究首次证实人眼Tennon’s囊成纤维细胞也可以重编程为iPS。下一步研究拟进一步通过检测基因表达，免疫化学及多能性功能检测以验证、纯化iPS并建系。并进一步探讨人眼Tennon’s囊成纤维细胞来源的iPS诱导分化为RGC的方案，为青光眼等不可逆性眼底变寻找种子细胞。