目的 对小鼠角膜上皮细胞进行原代培养及雄激素干预,探讨不同浓度雄激素对角膜上皮Mucins表达的影响,为干眼的进一步研究以及雄激素的临床应用提供实验依据。
方法 一方面将24只Balb/c小鼠分成6组,每组4只取双眼角膜剪成直径1mm大小的组织片进行角膜上皮原代细胞培养,6天后给予不同浓度雄激素0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml二氢睾酮(DHT)干预24小时,设空白对照一组。提取RNA反转录为cDNA,采用RealTime-PCR实验检测Muc1、 Muc4mRNA的表达,并进行统计学分析。另一方面用18只Balb/c小鼠分成6组,每组3只取双眼角膜进行角膜上皮细胞爬片培养,6天后给予雄激素干预,通过免疫荧光法观察角膜上皮Muc1,Muc4蛋白的表达。
结果 采用SPSS15.0统计学软件进行分析。中等浓度DHT干预组(0.2mg/ml)MUC1、MUC4的表达较空白对照组明显增加,差异有显著性(P<0.05)。低浓度和高浓度组的表达明显低于空白对照组(P<0.01)。免疫荧光染色观察MUC1、MUC4在角膜上皮细胞中均有表达,平均光密度分析各组件的差异,高浓度DHT干预组(0.5mg/ml、1mg/ml)MUC1、MUC4的表达较空白对照组、中等浓度组明显减少,差异显著。
结论 角膜上皮细胞表达MUC1、MUC4,并且是雄激素受体的靶组织。雄激素对角膜上皮Mucins的表达有一定调节,较低或较高浓度的雄激素对Mucins的表达有抑制作用;而一定水平的雄激素可以增加角膜上皮细胞Mucins的表达,进一步参与提高了泪膜的稳定性,在干眼治疗中发挥一定作用。
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