目的 系统研究SD大鼠睑板腺发育不同阶段的解剖学、组织学及其功能,探讨睑板腺发育过程中干细胞的定位、分化以及相关信号通路在睑板腺发育过程中的激活情况。
方法 采用胎龄为16天到出生后不同发育阶段的SD大鼠,通过裂隙灯观察、睑板解剖剥离以及水平位、矢状位、冠状位的睑板腺HE染色,对睑板腺不同发育阶段的形态学进行研究;采用油红染色法观察睑板腺腺泡的分泌功能;通过免疫组织化学和免疫荧光以及BrdU标记干细胞的方法对睑板腺发育过程中的干细胞定位、分化以及细胞信号通路相关蛋白进行检测;采用TUNEL法检测睑板腺发育过程中的细胞凋亡情况。
结果 通过对不同发育阶段的SD大鼠三维切面的观察,发现在胎龄15-17天时,睑板腺原始基芽形成;在胎龄18天到出生后3天,腺管开始发育;出生后4天腺泡开始分泌脂质,并且腺泡进一步发育;出生后8-11天为腺泡和腺管的快速发育期;在出生后13天左右,睑裂打开,睑板腺发育基本成熟。BrdU标记染色发现,出生后2天时BrdU阳性细胞主要位于基芽处,到第5天时主要位于新形成的腺泡、腺管和基芽处,到第8天时主要位于腺管分叉、腺管和腺泡周围;LGR6在出生后5天时于腺管处表达;TCF3在出生后4天时靠近睑裂处表达丰富,于出生后12天和成年在腺泡周围和腺管起始处表达;P63免疫组织化学发现成年SD大鼠腺泡周围部表达较强;EGFR1和EGFR2免疫荧光发现基芽形成腺泡和腺管处表达较强,而且EGFR1的表达强于EGFR2;β-catenin免疫荧光发现出生后的3天内主要表达在细胞膜上,出生后的4天之后在核上有表达;Notch和Hes1的免疫组织化学在出生2天以后在腺管、腺泡周围表达较强;PRDM免疫荧光在基芽、腺管和腺泡周围表达较强。
结论 SD大鼠睑板腺发育经历胚芽形成、腺泡形成、腺管形成、腺泡及腺管成熟等阶段。睑板腺干细胞来源于上皮,主要分布于基芽、腺管分叉处以及腺泡周围。Wnt、Notch、TGF- b、NFkB、BMP等信号通路参与了睑板腺发育过程中的调控。 |