目的  通过人工合成microRNA（artificial microRNA, amiRNA）靶向抑制神经纤毛蛋白-2（Neuropilin-2，NRP2）的功能，探讨NRP2是否通过VEGF-C/VEGFR-3途径调控炎症性角膜淋巴管的形成。

方法 构建靶向抑制NRP2基因的amiRNA重组体，转染至小鼠淋巴管内皮细胞后，通过实时荧光定量PCR、免疫印迹和免疫荧光的方法检测转染细胞NRP2表达水平的变化。另外，通过NRP2在VEGF-C/VEGFR-3通路及下游通路ERK1/2、p38激酶的作用机制研究，我们验证了NRP2功能抑制后对炎症因子诱导的淋巴管内皮细胞增殖、迁移及小管形成的影响。建立缝线诱导的小鼠角膜炎症模型，将人工合成NRP2-amiRNA，阴性对照-amiRNA或生理盐水于术后3d注射至角膜基质内，术后7 d后采用免疫荧光技术检测NRP2表达下调后对角膜新生血管、新生淋巴管、CD11b⁺ 巨噬细胞的作用。

结果 基因测序结果显示成功构建了靶向NRP2基因的人工microRNA重组体，转染至小鼠淋巴管内皮细胞后，实时荧光定量PCR、免疫荧光和免疫印迹结果显示NRP2表达水平明显下降。在体外和体内实验中我们均发现，炎症因子刺激后NRP2及VEGFR-3表达上调，阻断NRP2功能后VEGFR-3表达上调被抑制。此外，阻断NRP2功能后能够有效地降低炎症因子诱导的淋巴管内皮细胞迁移能力和淋巴管形成能力，但不影响其增殖能力，而且不完全依赖于血管内皮生长因子受体及下游通路来起作用。CD31, LYVE-1 和CD11b免疫荧光结果表明，角膜基质内注射NRP2-amiRNA重组体后能够抑制角膜新生淋巴管的生成，但角膜新生血管和 CD11b⁺ 巨噬细胞的浸润并无明显改变。

结论 NRP2部分依赖VEGFR-3信号通路参与炎症因子诱导的角膜淋巴管生成。我们的试验为单独研究新生血管或新生淋巴管的分子机制提供了一个新的研究工具，同时为移植排斥和其他淋巴管性疾病提供了新的治疗手段。