目的 用阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物（PAMAM-D）纳米颗粒做为载体，介导双自杀基因TK及CD，转染人Tenon'囊成纤维细胞(HTFs)，观察其在体外对HTFs的杀伤情况及未转染细胞的“旁观者效应”，寻找一种安全、有效抑制青光眼滤过手术后滤过通道瘢痕化的治疗方法。
方法 1.      以PAMAM-D纳米颗粒为载体，将载有双自杀基因的质粒pAcGFP1-Hyg-TK-CD转染HTFs，用RT-PCR、Westen-blot等方法检测鉴定双自杀基因TK、CD在HTFs内的表达；2.      MTT法检测自杀基因前药系统对表达自杀基因的HTFs-TK-CD细胞的杀伤效应；选择前药5-FC、GCV最佳的作用药物浓度；光镜及透射电镜观察前体药物GCV及5-FC作用后HTFs的形态变化，流式细胞仪检测HTFs的凋亡率，并观察双自杀基因的“旁观者效应”。
结果 1.      HTFs-TK-CD细胞分别经RT-PCR及Westen-blot检测鉴定，证明分别有双自杀基因TK及CD mRNA及蛋白质在HTFs内的表达；2.      光镜下未转染自杀基因的HTFs细胞，应用前体药物GCV和/或5-FC后，细胞生长状态和增殖无明显变化；且GCV和5-FC联合用药较二者单独用药无明显差异；转染自杀基因的HTFs细胞，应用前体药物后，与对照组相比细胞生长状态变差，细胞数量减少；且GCV和5-FC联合应用较二者单独应用细胞生长状态和数量变化更明显。透射电镜下表现细胞的凋亡变化。HTFs-TK-CD组加入前体药物GCV 3 µg/ml、5-FC 200 µg/ml及后，细胞凋亡率分别为11.86%和22.37%，二者联合应用时，凋亡率为33.13%。GCV与5-FC不仅能杀伤转染的HTFs细胞，而且具有“旁观者效应”。
结论 1.      G5-PAMAM-D纳米颗粒介导HSV-TK/GCV联合CD/5-FC双自杀基因系统成功转染HTFs，通过RT-PCR及Western blot检测证实得到表达；2.      TK、CD转染HTFs细胞后，给予前药5-FC、GCV达到一定浓度时，它们转化而成的细胞毒性物质对HTFs细胞在体外产生杀伤作用，且联合应用5-FC+GCV对HTFs细胞在体外产生的杀伤作用强于二者单独应用，并存在“旁观者效应”，为最终提高青光眼手术成功率奠定基础。