目的 在PVR大鼠模型中检测胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6, IGFBP-6)的表达,并探讨其参与PVR的机制。
方法 透明质酸酶液化玻璃体后,用玻璃体腔注射RPE细胞(含RPE-J细胞106/眼 )和富含血小板血浆(含血小板107/眼)的方法建立Wistar大鼠PVR模型(实验组),玻璃体腔注射生理盐水为实验对照组,观察大鼠眼底照相、组织病理学证实PVR的形成。收集其血清,应用免疫印迹(western blot)方法检测IGFBP-6的表达。体外实验中,采用人视网膜细胞株ARPE-19,实验组(IGFBP-6 VEGF、TGF-β、PDGF、IGF-Ⅱ)、阳性对照组(不同浓度的VEGF、TGF-β、PDGF、IGF-Ⅱ)和不同浓度的阴性对照组(无血清培养液)。采用噻唑蓝染色法(MTS)观察细胞增殖的影响,细胞划痕法观察细胞迁移的影响。
结果 术后28d,89.3%的大鼠造模成功,并出现相应PVR病理改变,Western blotting分析显示IGFBP-6在所有PVR大鼠血清中均可检测到,且显著高于实验对照组。MTS比色法显示24、48h后,当IGF-Ⅱ浓度为10、50、100ng/ml时阳性对照组的OD值较阴性对照组显著提高(P<0.01),且OD值的提高与IGF-Ⅱ呈剂量依赖性;当IGFBP-6浓度为100、500、1000ng/ml时,实验组OD值较阳性对照组明显下降(P<0.01);在细胞划痕实验24、48h后,IGF-Ⅱ浓度为50、100ng/ml时阳性对照组细胞愈合率较阴性对照组显著提高(P<0.01),IGFBP-6浓度为500、1000ng/ml时,实验组的细胞愈合率较阳性对照组显著下降(P<0.01)。
结论 玻璃体腔注射RPE细胞和富含血小板血浆的方法可以成功建立PVR大鼠模型;IGFBP-6在PVR大鼠血清表达增加;IGFBP-6可抑制IGF-Ⅱ诱发的RPE细胞增殖和迁移。 |