目的 建立原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)患者小梁网细胞体外培养体系,观察不同浓度的可溶性CD44分子(soluble CD44,sCD44)对小梁网细胞凋亡的影响,研究sCD44与POAG之间的关系, 进一步探讨POAG的发病机制。
方法 采用组织块法原代培养小梁网细胞,取传3代的小梁网细胞分别加入含sCD44终浓度为0ng/ml(对照组),1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml的无血清培养基,分别培养24小时后收集细胞,采用CCK-8、荧光显微镜和流式细胞仪检测法,研究sCD44对小梁网细胞凋亡的影响。
结果 通过CCK-8法检测发现:随着sCD44终浓度的增加,对POAG患者小梁网细胞的抑制作用增强,且各实验组与对照组之间相比差异有统计学意义(P<0.05);通过荧光显微镜观察显示随着sCD44终浓度的增加,早期和晚期凋亡细胞明显增多;通过流式细胞仪法检测sCD44终浓度为1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml实验组小梁网细胞凋亡率分别为(10.7283±0.0223),(17.3267±0.0250),(21.1483±0.0248),(25.1267±0.0281),(29.9900±0.0335),均高于对照组(2.5550±0.0187),且各实验组与对照组之间相比差异有统计学意义(P<0.05);
结论 sCD44在一定范围内可以抑制POAG患者小梁网细胞的增殖,促进细胞的凋亡,并且呈现一定的剂量依赖性,人眼房水中sCD44含量的变化可能参与POAG的发病机制。 |