目的 研究GSK-3阻滞剂对血清剥夺模型中RGC-5细胞凋亡的保护机制。
方法 通过研究不同血清剥夺时间点(12,24,48,72小时)的RGC-5细胞凋亡情况,分别检测其凋亡率。分别用hoechst33258染核和TUNEL试剂对凋亡细胞进行染色,计数,MTT法检测细胞活力,Westernblot检测细胞GSK-3磷酸化变化,caspase-3蛋白表达的变化。选取线粒体膜电位,ATP含量等指标检测来RGC-5细胞在血清剥夺模型中线粒体功能的改变。给予GSK-3阻滞剂观察其对血清剥夺模型下RGC-5凋亡以及对线粒体功能的影响。
结果 RGC-5细胞在血清剥夺12,24,48,72小时的凋亡率分别为8%,21%,40%,45%。westernblot检测RGC-5细胞血清剥夺模型中P-GSK-3含量增高,caspase-3激活。线粒体功能检测发现血清剥夺模型下线粒体膜电位水平和ATP含量明显降低。我们发现给予GSK-3阻滞剂可以明显的减少血清剥夺模型中RGC-5细胞的凋亡,降低GSK-3磷酸化水平和caspase-3蛋白表达,保持线粒体膜电位水平和ATP含量。
结论 在血清剥夺模型中,RGC-5细胞发生凋亡,其凋亡的发生机制和GSK-3/线粒体功能密切相关,给予GSK-3阻滞剂可以明显的改善线粒体功能,减少细胞凋亡。 |