目的 利用废弃卵母细胞获得的人孤雌胚胎干细胞(PESCs)诱导分化为视网膜色素上皮(RPE)细胞,研究其分子生物学特征。
方法 应用试管婴儿治疗患者不成熟卵母细胞获得人PESCs。去bFGF培养,获得色素克隆,移至matrigel上,直至六边形色素上皮形成。免疫荧光组织化学ZO-1染色。real time PCR方法,检测RPE细胞特征性mRNA,与fRPE对照研究。
结果 ①诱导分化3-4w,饲养层逐渐出现色素克隆,移入铺有mertrigel的六孔板,细胞贴壁单层生长,周边细胞初始无色素,4-6w开始产生色素颗粒,具备六边形形态。ZO-1染色显示清晰六边形形态。②分化过程,Oct-4水平逐渐下降, PAX-6、RPE65和ZO-1呈上升趋势。PESCs-RPE的PAX-6水平高于fRPE,而RPE65和ZO-1低于fRPE。
结论 人PESCs可定向诱导分化为RPE细胞,其分子生物学特征与fRPE相近,但存在一定差异,可能与成熟程度有关。 |