目的 本实验拟在建立豚鼠形觉剥夺性近视模型的基础上,应用RT-PCR及Westen blotting技术检测巩膜MMP-2和TIMP-2mRNA及蛋白表达,以探讨形觉剥夺性近视的发生机制,为近视治疗的研究提供一条新的思路。
方法 1.动物模型的建立:选用出生3天花色豚鼠60只。10只用于RT-PCR检测,另50只用于免疫印迹(Western blotting)检测,右眼以半透明试管底制眼罩遮盖作为遮盖眼,左眼为开放对照眼, 遮盖8周去除眼罩。2.屈光度及眼轴长度检测:分别于遮盖前、遮盖后4周、8周,检影镜确定豚鼠双眼屈光状态, A型超声测定双眼轴长度。 3. RT-PCR检测巩膜MMP-2及TIMP-2 mRNA的表达。4.免疫印迹(Western blotting)检测巩膜MMP-2及TIMP-2 蛋白的表达
结果 1.遮盖眼与对照眼屈光度与眼轴比较:单眼遮盖8周后造成遮盖眼形成近视,遮盖眼屈光度(-3.40±1.33D) 与对照眼 (2.95±0.98D)相比差异有非常显著意义(P<0.01)。单眼遮盖8周后眼轴延长,遮盖眼眼轴(8.13±0.18mm) 与对照眼(7.33±0.20mm)相比差异有非常显著意义(P<0.01)。2. RT-PCR:遮盖眼巩膜MMP-2mRNA表达增多,与对照眼相比差异有非常显著意义(P<0.01)。而遮盖眼巩膜TIMP-2 mRNA表达减少,与对照眼相比差异有非常显著意义(P<0.01)。3.Western blotting:遮盖眼巩膜MMP-2mRNA蛋白表达增多,与对照眼相比差异有非常显著意义(P<0.01)。而遮盖眼巩膜TIMP-2蛋白表达减少,与对照眼相比差异有非常显著意义(P<0.01)。
结论 应用半透明眼罩单眼遮盖8周建立了哺乳动物豚鼠形觉剥夺性近视模型。单眼遮盖可造成遮盖眼巩膜MMP-2mRNA及蛋白表达增多, TIMP-2mRNA及蛋白表达减少。提示MMP-2/ TIMP-2的平衡失调驱动FDM眼巩膜ECM重塑。