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| 缺氧诱导因子1α干扰RNA抑制视网膜新生血管的初步研究 |
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作者：许惠卓 刘… 文章来源：中南大学湘雅医院眼科 410008 点击数：1152 更新时间：2004/6/14 
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| 目的：通过基因重组技术构建HIF-1αdsRNA重组质粒，探讨其对HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的调控作用以及对氧诱导小鼠视网膜新生血管的抑制作用。
方法：
1.设计合成HIF-1αsiRNA片段928，通过基因重组技术将HIF-1α siRNA片段928插入pSUPER.retro载体中，从而构建HIF-1α siRNA表达质粒pSUPER-dsRNA928，通过转化大肠杆菌，抽提质粒，采用双酶切（Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ）和测序加以鉴定，以利于基因功能的研究。
2. 通过脂质体分别介导pSUPER-dsRNA928转染鼻咽癌细胞，对照组转染pSUPER.retro空载体，采用半定量RT－PCR方法检测HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达。
3. 将30只C57BL/6J小鼠分为3组，正常干预组、对照组和基因治疗组，每组10只；其中正常干预组为正常出生后（Postnatal，P）12天的 C57BL/6J小鼠，注射pSUPER-dsRNA928；对照组为从氧仓取出的P12 C57BL/6J小鼠，注射空载体；基因治疗组为从氧仓取出的P12 C57BL/6J小鼠，注射pSUPER-dsRNA928，均采用脂质体介导。通过FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的变化，通过组织切片观察突破视网膜内界膜的细胞核数目。
结果：
1.经双酶切得到一条小于400bp的产物，与我们预计的片段大小（285bp）相符；测序结果显示，HIF-1αsiRNA片段928被成功地克隆入pSUPER.retro 载体。
2.半定量RT－PCR结果显示转染pSUPER-dsRNA928的鼻咽癌细胞中HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达较对照组明显降低。
3基因治疗组较对照组，视网膜新生血管和无灌注区明显减少；基因治疗组突破内界膜的细胞核数目为18.13±4.6，对照组为47.56±5.3，两组比较差异有显著性（P<0.001）；正常干预组视网膜血管未见异常。
结论：我们成功地构建了HIF-1αsiRNA重组质粒pSUPER-dsRNA928；HIF-1α siRNA表达质粒pSUPER-dsRNA928能明显抑制HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达，且能明显抑制视网膜新生血管的生长。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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