目的 观察I型胶原缺氧刺激下人视网膜色素上皮细胞(RPE,retinal pigment epithelium)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α,hypoxia inducible factor-1α)和血管内皮生长因子(VEGF,vascular endothelial growth factor)以及盘状结构域受体2(DDR2, discoidin domain receptor 2)表达,探讨盘状结构域受体2(DDR2, discoidin domain receptor 2)在脉络膜新生血管(CNV,choroidal neovascularization)发生中的可能作用。 方法 对照实验研究。运用200µmol/L CoCl2处理RPE细胞建立化学缺氧模型,缺氧条件下以Ⅰ型胶原(10µg/ml,50℃孵箱内孵育)刺激,分别于作用后0,2,6,12,24hRT-PCR和Western blot检测RPE细胞中HIF-1α,VEGF的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA,enzyme linked immunosorbent assay)法观察RPE细胞培养上清中VEGF表达。于缺氧后0,2,6,12,24h用免疫荧光,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR, reverse transcription polymerase chain reaction)和免疫蛋白印迹法(Western blot)检测RPE细胞中DDR2的表达。 结果 缺氧状态下,RPE细胞HIF-1α,VEGF表达随缺氧时间的延长明显增加,缺氧胶原刺激后,可以抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGFmRNA表达上调。正常RPE细胞细胞核,胞质,胞膜上有微弱的DDR2荧光表达,随着缺氧时间延长DDR2蛋白及mRNA表达减弱。 结论 缺氧胶原刺激后,可以抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGFmRNA表达上调。缺氧条件下,RPE细胞中DDR2表达降低,I型胶原仍可以随时间迁移激活DDR2。DDR2可能参与脉络膜新生血管生成。. |