目的 本研究旨在体外诱导人Tenon's囊成纤维细胞(HTF,human tenon' s fibroblast cells)重编程为诱导多潜能干细胞(iPS,induced pluripotent stem cells),为视网膜神经再生的细胞替代治疗提供新的种子细胞来源。 方法 为了诱导产生iPS细胞,通过包装Retrovirus病毒生成Oct4、Sox2、c-myc 和Klf4四种转录因子,将其浓缩后转入HTF细胞,诱导产生iPS克隆。以人胚胎干细胞(hES, human embryonic stem cell)作为阳性对照,通过碱性磷酸酶活性检测,免疫荧光,流式细胞术,PCR,以及畸胎瘤形成,从形态和功能上鉴定其多能性。 结果 1. 重编程获得的iPS细胞形态与人ES细胞相似,呈扁平的单层,边界清晰,克隆内的细胞呈蜂窝状,胞核与胞质比增大。 2. 通过紫外分光光度计检测,证实iPS细胞具有与人ES细胞相当的碱性磷酸酶活性。 3. 通过免疫荧光检测和流式细胞术,证实iPS细胞表达ES细胞特异性表面抗原TRA-1-60,SSEA-1 ,Nanog和Oct-4等。 4. 通过PCR检测,证实iPS细胞表达ES标记基因。 5. 通过裸鼠皮下注射iPS细胞诱导畸胎瘤生成,证实iPS细胞具有多向分化潜能。 结论 该实验HTF细胞重编程来源的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、以及畸形瘤生成能力等方面都与人ES细胞相似,且高表达视网膜祖细胞相关基因SOX2,是视网膜神经再生的有价值的供体细胞。 |