目的 通过体外实验探讨Paxillin在VEGF-A诱导的HUVEC细胞运动和侵袭中的所起的作用。 方法 体外设计Paxillin小干扰RNA(Small interfering RNA ,siRNA),并转染传代培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)中,并分为3组,其中两组HUVEC分别转染Paxillin siRNA,scramble siRNA(对照组),与正常HUVEC组,并用VEFG-A作用。实时定量PCR和蛋白质印迹法检测HUVEC细胞中Paxillin基因表达的变化,噻唑蓝(MTT)比色法及Edu试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期变化,Boyden小室检测运动级侵袭的变化,以及HUVEC细胞体外管腔样成形及粘附的变化。 结果 VEGF-A作用后HUVEC细胞周期、粘附运动及侵袭能力均增强(P<0.05),黏附、迁移及侵袭穿膜细胞数较对照明显增多(P<0.05)。Paxillin-siRNA组增粘附运动及侵袭能力均减弱(P<0.05),实时定量PCR和蛋白质印迹检测显示siRNA组Paxillin表达下调。 结论 针对Paxillin基因的siRNA可以抑制VEGF-A诱导下的HUVEC细胞侵袭力和运动能力,为后续的角膜新生血管体内研究奠定基础。 人脐静脉内皮细胞;Paxillin;新生血管化;siRNA干扰 |