目的 评价经RGD修饰的丝素蛋白作为组织工程角膜角膜内皮载体的可行性。
方法 建立丝素蛋白植片家兔角膜层间和前房内模型，对植片在角膜层间以及前房内的情况做连续性观察。通过裂隙灯下观察，分别以角膜状态、新生血管、充血程度、分泌物以及前房反应作为评价指标，通过统计分析研究评价移植片对角膜和前房的影响；通过Pentacam三维眼前节分析仪观察植片植入后对角膜厚度及形态的影响；不同时间点对家兔角膜进行取材，HE染色观察植片是否引起角膜的炎症反应及组织结构变化；免疫荧光染色检测角膜内I型胶原、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白，原子力显微镜观察前房内放置的丝素植片表面沉积情况。
结果 术后2、4、7、14、30、90天用Pentacam三维眼前节分析仪检查，可见角膜形态良好，植片埋植于角膜基质层间。应用成组秩和检验（Mann-Whitney Test）比较实验组和对照组的角膜状态，局部充血，诱发角膜缘新生血管以及引起眼内分泌物情况结果，显示各时间点二组差异均无统计学意义（P>0.05）。HE染色丝素膜植入后胶原排列情况与正常角膜基本无差别，植片与周围组织贴合良好，7d有轻微炎性反应，植片层间少量白细胞聚集，1m后炎症反应消失与对照组无区别。I型胶原蛋白表达结果，1m后植片周围开始有I型胶原蛋白生成，排列规整。6m实验组植片与周围组织贴合处布满高荧光表达，I型胶原蛋白大量生成。Ⅲ型胶原蛋白结果，7d实验组染色呈线形高荧光， 1m后高荧光区域较7d实验组有所扩大。3m数量及范围均较1m实验组减少。6m后Ⅲ型胶原蛋白荧光较弱。纤维连接蛋白表达结果，实验组7d与植片贴合处角膜基质层出现连续线形阳性荧光表达。1m荧光强度及范围均较7d标本大幅增高，3m后荧光强度及范围与1m标本相较无明显差别，6m虽较3m范围扩大但数量减低，原子力显微镜显示丝素膜表面无明显沉积物。
结论 初步试验表明，RGD修饰的丝素蛋白因为其良好的生物相容性以及促进细胞外基质分泌的特点，是组织工程角膜材料的可选材料。