目的 OPTN (Optineurin，视神经病变诱导蛋白)是青光眼的致病基因之一，为了研究OPTN在神经节细胞层及整个视网膜中的功能，我们分离了与OPTN相互作用的蛋白质，发现其中之一为视网膜色素变性的致病基因NRL (Neural Retina Leucine zipper)。本研究在培养细胞及大鼠视网膜组织水平探讨了OPTN与NRL两蛋白的表达及其相互作用。
方法 1）克隆NRL和OPTN基因的cDNA，分别构建携带HA和FLAG标签序列的质粒并共转染HeLa细胞进行表达，用抗HA和抗FLAG标签的抗体分别进行免疫共沉淀（CoIP）和Western印记杂交（WB）探讨两者在HeLa细胞中的相互作用。2）制作正常大鼠眼球的石蜡包埋切片，用抗NRL抗体和抗OPTN抗体进行双重荧光抗体染色探讨NRL和OPTN在视网膜内的表达。3）分离大鼠的神经网膜，分别提取细胞质和细胞核内的蛋白质，通过使用抗NRL抗体和抗OPTN抗体进行CoIP和WB探讨两蛋白在神经网膜中的表达及其相互作用。
结果 1）在共表达NRL和OPTN的HeLa细胞中，用抗FLAG抗体免疫沉淀OPTN后用WB法检测出带有HA标签的NRL条带（33 kDa），用抗HA抗体免疫沉淀NRL后用WB法检测出带有FLAG标签的OPTN条带（69 kDa），证明NRL和OPTN在HeLa细胞中相互结合。2）正常大鼠眼组织切片的双重荧光染色显示，NRL在外颗粒层（视细胞核）内表达，而OPTN在视细胞内节、外丛状层、外颗粒层内均有表达，且主要在细胞质内表达，一部分细胞核内也有表达。此结果提示了OPTN在视细胞核内与NRL相互作用的可能性。3）通过WB法对大鼠神经网膜细胞质及细胞核内蛋白提取物的研究结果证明了OPTN主要存在于细胞质内，但细胞核内也有少量表达。CoIP结果进一步提示了NRL与OPTN在细胞核内的相互作用。
结论 本研究首次强调了OPTN在视细胞中的表达。OPTN和NRL在体外的相互作用及OPTN在光感受器中的表达提示，OPTN可能通过与NRL的相互作用发挥部分功能。NRL是目前已知与OPTN相互作用的蛋白质中首个具有眼组织表达特异性的蛋白。