目的  建立三维鸡胚视网膜组织块培养体系并在此体系中研究黑素细胞刺激素（α-MSH）对谷氨酸引起的视网膜神经毒性的保护作用。

方法  从胚胎第9天（E9）的鸡胚中取双侧眼球浸泡在0.5ml培养基中，在解剖显微镜下，从眼球的后极部正中开始剥离视网膜色素上皮层，脉络膜和部分巩膜组织。将剥离后的组织转移至带有插入式半透膜和培养基的组织培养皿中，然后轻轻去除晶状体和玻璃体，用眼科剪在视网膜周边剪3-4个缺口，使三叶草形的视网膜平展在插入式半透膜上，节细胞层朝上，感光细胞层朝下进行培养。收集体外培养第3、5、7天（3DIV，5DIV，7DIV）的视网膜组织块和相对应胚胎发育阶段的第12，14及16天（E12，E14,E16）的视网膜，进行HE染色检测鸡胚视网膜组织块在体外培养的形态完整性。分别收集上述时点的视网膜组织块和鸡胚视网膜，以及出生后第1天的鸡视网膜，提取总RNA,行实时RT-PCR检测α-MSH受体（MCRs）在体外培养的视网膜组织块和鸡胚视网膜中的表达。在谷氨酸诱导的神经毒性实验中，将3DIV的视网膜组织块分为谷氨酸刺激组、α-MSH预孵育继而给予谷氨酸刺激组，以及正常培养组。处理48h后，4%多聚甲醛固定，行TUNNEL染色，定量检测各组神经视网膜凋亡状况。

结果  HE染色结果显示，视网膜组织块在3DIV，5DIV和7DIV各层结构完整，与鸡胚体内E12，14和16的视网膜形态相似，只是由于缺乏体内组织结构限制而略显松散。实时RT-PCR结果初步显示MC1R、MC4R、MC5R在鸡胚视网膜中均有表达。MC1R在胚胎发育过程中表达量较低，在出生后迅速升高；而MC5R则相反，在胚胎中呈高表达，出生后则迅速降低。MC4R在出生前后无明显变化。在体外培养的视网膜组织块中，MCRs呈现出与胚胎视网膜相似的表达趋势，但时相略有滞后。TUNNEL染色结果表明，α-MSH+谷氨酸刺激组的凋亡细胞数量明显少于单纯谷氨酸刺激组，且与正常培养组相似。

结论  鸡胚组织块三维培养体系已建立。MCRs在鸡胚发育和出生后表现出不同的时相变化，提示各自所介导的不同功能。α-MSH 在鸡胚视网膜组织块培养体系中对谷氨酸诱导的细胞凋亡有拮抗作用，初步提示α-MSH对谷氨酸诱导的神经毒性具有保护作用，其保护作用机制正在研究中。