目的 研究依托泊甙对视网膜母细胞瘤细胞(Rb)表达B7-H1的影响,以及miR-513a-5p在此过程中的作用。 方法 以依托萡甙的终浓度分为0,2.5,5,10,20,40μg/ml 组,处理Rb细胞24h后,RT-PCR和Real-Time PCR检测B7-H1 mRNA表达,流式细胞术检测蛋白表达;Real-Time PCR检测在此过程中miR-513a-5p的表达变化;miR-513a-5p拟似物和抑制物转染细胞,Real-Time PCR和流式细胞术观察拟似物和抑制物对细胞表达B7-H1的影响;采用TargetScan5.2预测B7-H1 mRNA 3'非翻译区(3'-UTR)中与miR-513a-5p结合的位点,构建包含此位点的荧光素酶报告质粒,转染细胞,分析荧光素酶活性。 结果 依托泊甙刺激Rb细胞表达B7H1 mRNA和蛋白,5μg /ml时作用达到顶峰(P<0.05)。miR-513a-5p的表达水平变化趋势与B7-H1表达完全相反。加入miR-513a-5p 抑制物后,开始出现B7-H1的表达,表达水平随着抑制物的浓度增加而提高(P<0.05)。依托萡甙的浓度为5ug/ml, Rb细胞达到表达B7-H1的最高浓度,当加入miR-513a-5p 拟似物后,B7-H1的表达出现减少,随着拟似物的浓度增加,B7-H1的表达水平逐渐降低(P<0.01);miR-513a-5p 拟似物抑制荧光素酶的活性。 结论 依托泊甙促进Rb细胞表达B7-H1,可能与化疗耐受有关。miR-513a-5p通过与B7-H1 mRNA的3'-UTR结合,抑制B7-H1的mRNA和蛋白表达。
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