目的 本实验研究糖尿病视网膜病变（Diabetic retinopathy, DR）患者细胞间粘附分子 1 ( Intercellular adhesion molecule-1 , ICAM-1)和β2-整合素家族中的CD18、Fas及Fas-L的变化，并通过共培养人视网膜微血管内皮细胞（Human retinal endothelial cells, HRECs）与人外周血白细胞，观察白细胞粘附对内皮细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。
方法 采集糖尿病视网膜病变患者及健康体检者空腹抗凝静脉血2ml（各30例），应用percoll密度梯度离心法分离外周血白细胞，通过流式细胞学分析外周血白细胞表面CD18、Fas-L表达。从眼库获得DR患者视网膜及非DR患者视网膜各10例，Western blot检测人视网膜ICAM-1及Fas蛋白表达。原代培养HRECs，CD31免疫细胞化学染色检测HRECs纯度大于95%，应用第3-5代细胞进行实验。DR患者外周血白细胞及血糖正常人外周血白细胞分别在低糖（5.5mM）或高糖（25mM）环境下与HRECs共培养24h，流式细胞仪CD144 PE -Anexin V FITC-PI三重标记检测共培养后HRECs凋亡情况。BCECF AM荧光探针预先标记白细胞后与HRECs共培养12h，TUNEL原位标记凋亡的HRECs，共聚焦显微镜检测白细胞粘附引起的HRECs凋亡。之后分别用ICAM-1、CD18、Fas及Fas-L中和抗体预处理白细胞或HRECs后重复上述检测凋亡实验。
结果 流式细胞学结果显示DR患者较正常者外周血白细胞表面CD18及Fas-L表达显著升高（P < 0.05）。Western blot显示DR患者较血糖正常者视网膜ICAM-1及Fas蛋白表达增加（P < 0.05）。高糖条件下共培养DR患者白细胞和HRECs，HRECs凋亡率较其他各组显著升高（P < 0.05）。共聚焦显微镜显示有白细胞粘附的内皮细胞凋亡明显。加入ICAM-1、CD18、Fas及Fas-L中和抗体中任一种，均可抑制共培养后HRECs凋亡。
结论 炎症反应在糖尿病视网膜病变中发挥作用，ICAM-1、CD18介导的白细胞粘附对视网膜微血管内皮细胞凋亡起重要作用，其机制可能为通过Fas-FasL途径启动细胞凋亡。