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A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达           ★★★
A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达
作者:曹文萍 文章来源:哈尔滨医科大学附属第一医院 点击数:353 更新时间:2012/9/13

目的 构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供试验基础。
方法 应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮细胞HCEWestern Blot法检测转染后培养基中HCE分泌的TGFBI蛋白的表达。
结果 经克隆、酶切、测序证实了获得A546D突变型TGFBI基因,并准确插入到pcDNA3.1载体中,野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达。
结论 成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。

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