目的 观察α晶体蛋白是否能调节星形胶质细胞(Astrocyte)的活化、增殖功能。 方法 以体外培养的星形胶质细胞株((Astrocyte)为对象,分为正常组、划痕组(激活)、α晶体蛋白组(划痕后添加10-4mg/ml a-晶体蛋白,后称蛋白组)。用CCK-8细胞增殖实验检测培养48 h的星形胶质细胞(Astrocyte)增殖情况;通过细胞周期实验分别检测三组在细胞培养4 d、7 d、10 d时,对细胞周期影响;通过免疫组织化学实验分别检测三组细胞在培养4 d时对硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)、波形蛋白(Vimentin)表达情况。Western Blot实验检测划痕组、蛋白组,波形蛋白(Vimentin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况; 结果 1、CCK-8测定划痕组吸光度值明显高于正常组,而蛋白组的吸光度值显著低于划痕组,其光密度值分别是(正常组0.645±0.014,划痕组0.902±0.043,蛋白组0.732±0.011)。2、细胞周期检测,细胞处于S期比率划痕组与正常组之间无显著性差异。而划痕组与蛋白组比较发现,在添加a晶体蛋白后的第4 d、7 d、10 d时,S期细胞分别为22.41%、28.34%、46.68%(N=3)。3、Western Blot实验显示:蛋白组波形蛋白(Vimentin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达显著低于划痕组。4、免疫组化表明蛋白组的CSPGs、Vimentin蛋白表达要明显低于划痕组,且蛋白组培养4d的星形胶质细胞(Astrocyte)形态与划痕组及正常组发生了明显的变化。 结论 a-晶体蛋白可抑制星形胶质细胞(Astrocyte)的增殖及CSPGs、Vimentin、GFAP蛋白的表达。 |