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| AIP1介导Dll4-Notch1信号动态调控生理性视网膜血管发生 |
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作者：徐哲 文章来源：广州军区广州总医院 点击数：244 更新时间：2012/9/13 
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目的 AIP1是Ras GTPase 活化蛋白家族新成员，做为VEGFR2内源性抑制因子抑制VEGFR2介导的病理性血管增生。本研究目的在于探讨AIP1对正常生理条件视网膜血管发生的影响，并探讨其内在的不同分子机制。
方法 以AIP1-WT、AIP1-KO小鼠视网膜为对象，选择出生后P4，P5，P6，P7，P8，P10，P12，P17时间点小鼠收取视网膜，isolectin IB4视网膜铺片免疫荧光染色观察视网膜血管发育形态；视网膜组织提取mRNA及蛋白，real time PCR和Western Blot分析AIP1敲除对Dll4-Notch1信号表达的影响；进而以小鼠视网膜血管内皮细胞研究信号调控及AIP1-Dll4可能存在的相互作用。
结果 出生后早期AIP1-KO小鼠视网膜血管发育明显慢于AIP1-WT鼠。AIP1-KO鼠Notch1及Hey1 mRNA表达显著增加。Western Blot VEGFR2-Dll4-Notch1 cleaved同向变化：P4、P5表达逐渐增加，VEGFR2在P5达到峰值；P7 Dll4表达升至峰值时VEGFR2的表达却明显下降，视网膜血管出芽及发育迟缓，提示高表达至一定程度的Dll4对VEGFR2负调控，说明视网膜血管发生初期，AIP1-Dll4-Notch1信号比AIP1-VEGFR2起更关键的作用；P17 Dll4表达增加但血管出芽没有显著抑制，提示Notch在视网膜发育完成时不再起主导作用。分子机制，AIP1-WT鼠视网膜微血管内皮细胞（MREC）VEGF处理30分钟时，Dll4表达第一次达到高峰，随后逐渐下降，2h重新表达增强；Notch1被动活化形态与Dll4一致。但在Dll4达高峰时（30min、2h）VEGFR2表达相应减弱，说明Dll4高表达对VEGFR2负调控。值得注意的是，AIP1此时也显著增强。我们推测AIP1协同Dll4，共同抑制VEGFR2活化。AIP1-KO MREC VEGF处理Dll4立即达到峰值，随后下降直至1h后重新增加。C57BL/6J鼠MREC 检测发现Dll4高表达时，AIP1并不同时高表达，而是有15min延迟，说明Dll4发出负向调控信号后，AIP1参与VEGFR2通路的抑制。
结论 AIP1动态调控视网膜血管发生过程。其中，AIP1-Dll4-Notch1信号调控起更关键性的作用。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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