目的 通过腺相关病毒（AAV）载体介导人β-神经生长因子（β-NGF）基因和人血小板源性生长因子基因B（PDGF-B）转染体外培养的猫角膜内皮细胞，探讨其对该细胞生物学效应的影响。
方法 体外培养猫角膜内皮细胞，通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶（NSE）单克隆抗体免疫荧光染色鉴定细胞的种类及纯度。构建AAV载体，利用AAV载体介导绿荧光蛋白(GFP)基因转染猫角膜内皮细胞，根据其阳性表达率测定转染效率。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染猫角膜内皮细胞后，Real-Time PCR及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测转染24h、48h、72h后β-NGF和PDGF-B的表达变化。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染猫角膜内皮细胞72小时后，MTT检测细胞增殖能力的变化，流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例，检测外源基因对细胞周期的影响。
结果 猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整的细胞单层，经形态学观察、NSE的免疫荧光染色证明为纯净的猫角膜内皮细胞。AAV介导的绿色荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞72h后，荧光显微镜下可见到细胞内清晰的绿色荧光，测得转染效率可达67.8%。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染猫内皮细胞后，Real-Time PCR和Western blot结果显示，转染后各时间点猫角膜内皮细胞中β-NGF和PDGF-B的mRNA和蛋白表达随时间延长不断增高，与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。MTT结果显示，AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染猫角膜内皮细胞后增殖能力较对照组增强，差别均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染组细胞周期中G1期细胞比例增加。
结论 AAV可有效介导人β-NGF基因和PDGF-B基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞，并在猫角膜内皮细胞中持续稳定表达。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染猫角膜内皮细胞后可以增强细胞的增殖和迁移能力。