目的  研究pEgr-TNFα-TK双基因重组质粒转染进人脉络膜黑色素瘤细胞后，给予不同剂量的¹²⁵I照射，观察肿瘤细胞生长形态、增殖和凋亡情况，探究体外杀伤肿瘤细胞有效性和可行性。

方法  利用树状聚合纳米粒子将前期实验构建以早期生长反应基因-1（Early growth respond gene-1, Egr-1）作为启动序列，连接人源性肿瘤坏死因子α序列（TNFα）和人源性单纯疱疹病毒胸苷激酶序列（HSV-TK）所制备的pEgr-TNFα-TK双基因重组质粒、pEgr-TNFα重组质粒及pEgr-TK重组质粒等带有目的基因的重组质粒转染入对数期的OCM-1细胞中，分别作为双基因组、单基因1组和单基因2组，给予¹²⁵I照射联合GCV治疗后，进行透射电镜检查，观察放射治疗合并基因治疗后，细胞微结构的变化；而后分别利用倒置显微镜、细胞生长计数和细胞增殖检测试剂8（CCK-8）观察转染后OCM-1细胞的生长情况和杀伤作用；再利用流式细胞检测仪进行磷酯结合蛋白V/碘化丙啶（AnnexinV/PI）双染凋亡细胞检测及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）荧光染色检测，测试转染后细胞凋亡的组间差异。实验数据以平均值±标准偏差（x±s）表示，统计学处理采用SPSS 18.0软件进行多组间单因素方差分析。

结果  通过¹²⁵I照射后在透射电镜下可见转染后OCM-1细胞中，处于坏死状态的细胞数较未转染组多，双基因组明显于单基因组；细胞生长曲线显示，实验组细胞数明显低于未转染细胞组（P < 0.01）和假照射组（P < 0.01）。流式凋亡检测显示，实验组细胞凋亡率明显高于对照组（P < 0.01），以2Gy ¹²⁵I照射后单基因1组在72hr时早期凋亡率最高。Caspase-3荧光染色检测显示，实验组细胞活化Caspase-3含量明显高于对照组（P < 0.01），以2Gy ¹²⁵I照射后单基因1组和0.075Gy ¹²⁵I照射后单基因2组荧光染色数量最多。

结论  体外pEgr-TNFα-TK/GCV联合放射治疗可明显抑制人脉络膜黑色素瘤的生长作用，增加其凋亡反应。