| 目的 比较在蛋白质组学中使用的20 cm SDS-PAGE 电泳和传统的8 cmSDS-PAGE 电泳在 细胞膜钙ATP酶（PMCA） 同工异构体表观分子量测量方面的效果差异。方法 HLE B-3 细胞经培养至90％融合后，收集其膜蛋白。部分样品行 20 cm SDS-PAGE 电泳，条件为 16mA/gel 1.5 小时，然后改为24 mA/gel 4-5 小时, 另一部分样品行 8 cm SDS-PAGE 电泳, 条件为 200V 0.75 小时。在同一胶上同时电泳已知分子量的蛋白质标记物。分离厚的蛋白转移到PVDF膜上， 用针对细胞膜钙ATP酶（PMCA）同工异构体，PMCA 1 , PMCA2和 和PMCA4的特异性抗体进行Western blot蛋白质免疫印记检测。通过电泳移行距离与对数分子量的线性关系计算各个同工异构体表观分子量的检测。 结果 从电泳条带的形态上看，8cm胶中蛋白条带较细而浓集，而20cm胶中较宽而扩散。在8 cm 胶208 kDa 和126 kDa 条带之间的距离为 6.1 mm, 而在20cm 胶此距离为32.8 mm。126 kDa 和97 kDa条带之间的距离为5.2 mm, 而在20cm胶为20.2 mm。20 cm胶中各蛋白条带的移行距离较8cm胶显著增加(P<0.005)。但是在8cm胶中蛋白质条带的浓集性较好。在8cm胶中PMCA1, 2, 4的表观分子量分别为153.8, 153.5 和152.9 kDa。在20 cm胶中, 则分别为153.1,125.5 和147.4 kDa 。结论 本文首次证实20 cm 和8 cm SDS-PAGE 电泳均能成功检测HLE B-3 细胞中PMCA 1,2, 4的存在，但是检测出的表观分子量有所不同， PMCA1,2,4 的分子量在8cm胶中分别为153.8, 153.5 和152.9 kDa，而在20cm胶中分别为153.1,125.5和147.4 kda 。PMCA2很可能在20cm胶长时间的电泳过程中发生了蛋白水解现象。 |
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